当前位置:首页 > 产品项目

基因转导之病毒

病毒解决方案

文章来源:junengbio.com 作者:武汉聚能译通生物有限公司 发布时间:2014-03-27 11:30:45 点击数:

病毒.jpg基因转导之病毒

聚能译通是美国Genecopoeia湖北地区代理商。Genecopoeia是全球最大的基因克隆供应商之一,NCBI推荐的克隆供应商,公司有50000个人,小鼠,斑马鱼基因,多达20000个人类基因的开放阅读框架(ORF)已成功克隆到多种病毒载体上,人/小鼠miRNA过表达及抑制模板都已经成功克隆到病毒载体,能为客户提供快速,经济的病毒颗粒。公司有多种类型病毒载体可供客户选择,也可以为客户提供稳转细胞株服务,聚能译通生物专注基因功能研究巨头的资源及技术优势,带动病毒转染方法的普及,希望能为广大客户提供高效,性价比高的产品和服务
1;慢病毒全面解决方案

产品概览
 产品说明
功能特点
Lenti-Pac HIV表达包装试剂盒
基于HIV骨架的慢病毒包装质粒 ; 附赠eGFP对照克隆;
EndoFectin™ Lenti
转染试剂
提供产率优化的重组慢病毒
(
基于HIV的慢病毒载体)
Lenti-Pac FIV 表达包装试剂盒
基于FIV骨架的慢病毒包装质粒; 附赠eGFP对照克隆;
EndoFectin™ Lenti
转染试剂
提供产率优化的重组慢病毒
(
基于FIV的慢病毒载体)
GeneCopoeia293Ta慢病毒包装细胞系
1.5 x 106cells 细胞
低传代的认证细胞株
Lenti-Pac 慢病毒浓缩试剂盒
回收率可达90%,适用于几乎所有的慢病毒颗粒,无需额外离心,整个过程只需3小时。
快速简便的纯化慢病毒颗粒。
慢病毒颗粒滴度检测试剂盒
主要组分包括RNA提取试剂, qRT-PCR反应试剂以及内参对照
可快速、简便地测定病毒拷贝数,并确定病毒包装是否成功
GeneCopoeia GCI-L3 大肠杆菌化学转化感受态细胞
适合转化OmicsLink 慢病毒载体介导的ORF 表达克隆的理想细胞株
转化效率高;重组率低
Endofectin Lenti 转染试剂
专为 GeneCopoeia HIV/ FIV慢病毒表达系统优化
转染效率高、毒性低,结果可靠可重复
OmicsLink 慢病毒载体介导的ORF表达克隆
CMV 启动子驱动的25,000 个人类 /15,000小鼠源慢病毒表达克隆
可直接用于转染,包装出病毒颗粒的慢病毒表达克隆
OmicsLink 慢病毒载体介导的shRNA表达克隆
覆盖人、小鼠、大鼠全基因组,HIV/FIV慢病毒骨架载体,带有eGFPmCherry报告基因,
eGFPmCherry报告基因;
全基因组覆盖人、小鼠和大鼠基因
高效抑制靶基因;最低限度的脱靶效应
miExpress 前体microRNA表达克隆
750 个人 /450小鼠/270 个大鼠的miExpress 前体microRNA表达克隆, FIV慢病毒载体骨架,含eGFP报告基因
研究miRNA对相应基因和蛋白质的调控与功能
miArrest™慢病毒载体miRNA inhibitor表达克隆
1126个人 /672小鼠/408 个大鼠的miRNA,慢病毒载体骨架,含eGFPmCherry报告基因。
特异、高效地抑制生物体内源性miRNA的活性,是研究miRNA功能的必要工具
2;慢病毒包装简要流程

QQ图片20171221203553.png
 
3:提高慢病毒滴度的策略
1: 病毒载体中包含改善载体性能和提高病毒滴度的WPRE、RRE和cPPT/CTS序列
2:包装组分中含有经过比例优化的3种非病毒载体质粒
3:使用高品质的293T包装细胞系
4:使用高品质胎牛血清
5:使用能有效地和等比例地把病毒质粒和包装质粒转染到包装细胞的转染试剂
6:病毒制备过程中加入滴度增强剂
 
 4病毒系统比较

病毒表达系统
慢病毒表达系统
腺病毒表达系统
腺相关病毒表达系统
逆转录病毒
病毒基因组
RNA病毒
双链DNA病毒
单链DNA病毒
RNA病毒
是否整合
病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因
病毒基因组游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因
病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因
病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因
感染细胞类型
感染分裂和不分裂细胞
感染分裂和不分裂细胞
感染分裂和不分裂细胞
感染分裂细胞,但在干细胞中表达效率低
表达丰度
高水平表达
高水平表达
比逆转录低
高水平表达
表达时间
慢(2-4 天)
快(1-2 天)
   快(2-3天)
快(1-2 天)
滴度
最高可达10910TU/ml
滴度高达1012pfu/ml
滴度高达1012pfu/ml
最高可达10910TU/ml
克隆容量
可插入不超过8kb的外源片段,滴度随插入片段长度增加而降低
可插入高达8kb的外源片段,滴度随插入片段长度增加而降低
最多只能容纳5 kb外源DNA片段
可插入不超过6kb的外源片段
免疫原性
低免疫原性
高免疫原性
低免疫原性
低免疫原性
动物模型
可产生转基因动物,效率达50以上
不能得到转基因动物
可产生转基因动物,及基因治疗
可以,但很难
启动子
可以更换特异性启动子
可以更换特异性启动子
可更换特异性启动子
不需要启动子
能否用于MIRCORNA
可以
可以
可以
不可以
能否用于四环素诱导
TET-ON,TET-OFF
不可以
不可以
不可以

 5:AAV病毒血清型介绍
       GeneCopoeia提供多种适用性最广泛的血清型以供科研工作者选择。血清型是腺相关病毒的一个重要概念,不同血清型的差异主要在于衣壳蛋白的不同,外源基因选择合适靶细胞的血清型,对基因在特定宿主的高效表达非常重要。血清型选择请见下表。

血清型
主要适用组织
血清型描述
AAV-1
肌肉
对心肌、骨骼肌、神经元、神经胶质细胞组织的效果较好。
AAV-2
肌肉、肝脏、视网膜
使用历史最长,同时也是适用性较广泛的血清型,对神经细胞、肌肉、肝脏、脑组织的效果较好。
AAV-3
巨核细胞
对巨核细胞、肌肉、肝脏、肺脏、视网膜组织的效果较好。
AAV-4
视网膜
对神经元、肌肉、脑、视网膜组织的效果较好。
AAV-5
肺脏
对肺脏、神经元、滑膜关节、视网膜、胰腺组织的效果较好。
AAV-6
肌肉、肺脏
对肺脏、肝脏、心脏的效果较好。
AAV-7
肌肉、视网膜、神经元
对肌肉、神经元、肝脏的效果较好。
AAV-8
肝脏
对肌肉、脑、肝脏、视网膜的效果较好。
AAV-9
广泛适用
对肌肉、心脏、肺脏、肝脏、脑的效果较好。
AAV-10
胸膜、中枢神经系统
对肺脏、肌肉、心脏、中枢神经系统的效果较好。
AAV-DJ
广泛适用
该血清型是8种天然存在的血清型的优化混合,对多种人源组织及器官有较好的感染效果。其中,AAV-DJ对肝源细胞的导向性较强。
AAV-DJ/8
广泛适用
该血清型由AAV-DJ进一步改造所得。通过删除AAV-DJHBD位点(heparin binding domain),降低该血清型在活体实验中对肝导向性干扰,从而相对提高在非肝源细胞的感染效率。

AAV病毒载体的选择
CMV
强启动子,应用范围较广
N/A
3kb
EF-1α
也是应用范围较广的启动子。在活体实验的表现基本优于CMV。
N/A
3kb
CAG
在活体实验中常用的强启动子。
N/A
3kb
CBH
强启动子,且表达时间较长。
N/A
3kb
CMV
强启动子,应用范围较广。
IRES-eGFP
2kb
EF-1α
也是应用范围较广的启动子。在活体实验的表现基本优于CMV。
IRES-eGFP
2kb
CAG
在活体实验中常用的强启动子。
IRES-eGFP
2kb
CBH
强启动子,且表达时间较长。
IRES-eGFP
2kb
CAMKlla
在大脑皮层和海马体中的兴奋性神经元有特异性表达。
N/A
2.3kb
hSYN
人源synapsin-1基因启动子,是神经元特异启动子。
N/A
2.5kb
MHC
一种人源的心肌细胞特异启动子。
N/A
2.5kb


 
 
[打印文章] [添加收藏]